## SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指导

### 一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：首次推荐1:2传代
备注：使用无菌离心管收集培养基以供对比，如果效果不佳，建议直接使用我们的完整培养基。

### 二、细胞处理方法

收到细胞后，培养至良好状态，充满完整培养液并封好瓶口，便于运输。首先，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内操作。将细胞瓶放入35℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞稳定。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好在40x, 100x和200x下各一张）。前三天的照片为关键售后依据，未提供照片默认细胞状态良好。另外，传代后可将一瓶使用原瓶完全培养基，另一瓶使用自配培养基以便进行对比。

### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：如果细胞未超过80%汇合度，收集瓶中的完全培养液至离心管中，留5ml培养基并放入35℃、5% CO2培养箱；若细胞密度超80%，可进行传代，步骤如下：
1. 弃去培养上清，使用无钙镁PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于35℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状态。若细胞大部分变圆并开始脱落，迅速返回操作台，轻轻敲打培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml的完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入35℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时后再移入。

c. 细胞复苏：
1. 取出液氮中的细胞冻存管（注意佩戴防护装备），快速放入35℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入35℃、5% CO2的培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

部分细胞在运输中可能会出现脱落现象，属正常情况。如脱落较多，请将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作对比，再添加胰酶进行处理。

### 五、售后条款

1）细胞问题处理标准：
可重发的情况包括：细胞在运输中丢失、破损或严重漏液；48小时内提出有效的细胞污染问题；复苏后细胞存活率低；未开封状态下出现污染；7天内反馈细胞活性问题。
2）不予重发的情况：
客户导致的细胞污染；操作不当；使用非推荐培养体系；细胞状态不良且未提供前三天照片。

如需了解更多信息，请访问我们的官方网站，了解尊龙凯时人生就博的细胞培养解决方案以及相关服务。